Cromatograma

También: chromatogram · trazo de HPLC · perfil cromatográfico

Gráfica que produce un análisis cromatográfico: la señal del detector frente al tiempo, en la que cada componente de la muestra aparece como un pico separado.

El eje horizontal es el tiempo desde la inyección y el vertical la respuesta del detector, en HPLC de péptidos casi siempre absorbancia ultravioleta a 214–220 nm, donde absorbe el enlace peptídico. Cada compuesto que sale de la columna dibuja un pico; la línea plana entre picos es la línea base. El área bajo cada pico es proporcional a la cantidad de ese componente que llegó al detector.

De un cromatograma de pureza se leen tres cosas: el tiempo de retención del pico principal, su área como porcentaje del área total —eso es la pureza en área porcentual— y los picos menores, que en un péptido sintético suelen ser secuencias truncadas, variantes desamidadas u oxidadas y restos de la síntesis. Un cromatograma de BPC-157 al 99,4 % muestra un pico dominante y un puñado de picos pequeños que suman el 0,6 % restante.

Un cromatograma solo es comparable con otro obtenido en las mismas condiciones: columna, fase móvil, gradiente, flujo, temperatura y longitud de onda. Cambiar cualquiera de ellas mueve los picos y puede fundir dos que antes estaban separados, o separar dos que antes se solapaban. Por eso un informe serio describe el método, y por eso dos cifras de pureza del mismo lote en dos laboratorios pueden diferir en décimas.