Confirmación de identidad por masas

También: identity confirmation · identidad por espectrometría de masas · ESI-MS identity · masa observada vs teórica

Comprobación de que la masa medida por espectrometría coincide con la calculada a partir de la secuencia; confirma que el compuesto del vial es el de la etiqueta, dentro de los límites del método.

La secuencia y las modificaciones de un péptido fijan una fórmula molecular, y la fórmula fija una masa teórica. El espectrómetro mide la masa real de lo que hay en la muestra, y la identidad se da por confirmada cuando ambas coinciden dentro de la tolerancia del instrumento. En la ionización por electrospray el péptido aparece con varias cargas: la tirzepatida se observa cerca de m/z 1204 con cuatro cargas y 964 con cinco, y el software reconstruye la masa de 4813.

La masa discrimina con fuerza entre compuestos de tamaño distinto. TB-500 (889 g/mol) y la timosina β4 completa (4963) no se confunden; semaglutida (4114), retatrutida (4731) y tirzepatida (4814) se separan sin ambigüedad, y por eso un ensayo de identificación de GLP-1 puede decir cuál de las tres contiene un vial. También detecta modificaciones que cambian la masa, como una desamidación o un residuo faltante.

Lo que la masa no ve son los isómeros: una D-fenilalanina pesa lo mismo que una L-fenilalanina, y dos secuencias con los mismos residuos en otro orden tienen masa idéntica. Para eso hace falta fragmentar el péptido (MS/MS) o comparar el tiempo de retención con un patrón. Un informe que dice «identidad confirmada por MS» afirma que la masa es compatible; qué más comprobó depende del método.